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    • 聚羥基脂肪酸酯的生物修飾及其生物相容性研究

      目的探討經聚羥基脂肪酸酯表面顆粒結合蛋白(polyhydroxyalkanoates granule binding protein, PhaP)-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)融合蛋白修飾后的聚羥基丁酸戊酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate),PHBV]和聚羥基丁酸己酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate),PHBHHx]的親水性及其與軟骨細胞的生物相容性。 方法利用溶劑揮發法制備PHBV和PHBHHx生物膜材料,掃描電鏡觀察材料結構;通過蛋白工程技術表達純化PhaP-RGD融合蛋白,按照3.5 mg/mL濃度對兩種生物膜材料進行蛋白修飾,通過測量接觸角檢測蛋白修飾前后材料表面親疏水性的改變。采用三步消化法體外分離培養人鼻中隔軟骨細胞并傳代。取第2代細胞分別接種于PHBV(A1組)、PHBV/PhaP-RGD(A2組)、PHBHHx(B1組)、PHBHHx/PhaP-RGD(B2組)、細胞培養板(C組)。培養3 d后行DAPI染色觀察細胞增殖情況;3、7 d通過MTT法檢測細胞增殖能力;7 d掃描電鏡下觀察細胞在生物膜材料表面的貼附及形態結構,并通過甲苯胺藍染色初步檢測細胞外基質分泌情況。 結果掃描電鏡觀察示PHBV和PHBHHx生物膜材料表面為多孔結構;經融合蛋白修飾后PHBV、PHBHHx生物膜材料表面接觸角均顯著減小,差異有統計學意義(P<0.05)。細胞接種于生物膜材料表面后均能生長,培養3 d后B2組細胞增殖能力最強(P<0.05);7 d時各組軟骨細胞增殖能力均較3 d增強(P<0.05),組間比較B1、B2組高于A1、A2、C組,B2組高于B1組、A1組高于A2組(P<0.05)。培養7 d,甲苯胺藍染色示A1、A2、B1、B2組材料表面均可見藍色異染,其中A1、A2組染色程度相似,B2組染色較B1組深;掃描電鏡觀察示各組細胞貼附良好,細胞之間形成連接,并伸入材料孔隙內。 結論經PhaP-RGD融合蛋白修飾的PHBHHx生物膜材料與軟骨細胞有良好的生物相容性。

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