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    • 沉默 CDH1 基因促進非小細胞肺癌 A549 細胞系轉移侵襲的機制

      目的探究小干擾 RNA(siRNA)沉默非小細胞肺癌 A549 細胞系 E-鈣黏蛋白(E-cadherin)基因(CDH1)后對于 A549 細胞轉移和侵襲的促進作用。方法采用 siRNA 技術沉默 A549 細胞中的 CDH1 基因,采用 RT-QPCR 和 Western blot 法檢測沉默后的基因表達與蛋白表達。將細胞分為對照組(Control)、siRNA 陰性組(siRNA-NC)和 siRNA 基因沉默組(siRNA-CDH1),CCK-8 檢測基因沉默后 12、24、48、72 h 細胞活力,細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力的變化,Transwell 小室檢測細胞侵襲能力的變化,Western blot 法檢測細胞轉移侵襲關鍵因子波形蛋白(vimentin),基質金屬蛋白 MMP-2 和 MMP-9,以及 N-cadherin的表達水平。RT-QPCR 檢測 vimentin、MMP-2、MMP-9 以及 Slug、Snail 的 mRNA 表達水平。結果CDH1 沉默后,A549 細胞活力顯著增高,且呈時間依賴性,相比 Control 組和 siRNA-NC 組差異有統計學意義(P<0.05)。細胞劃痕實驗和 Transwell 小室實驗結果顯示,CDH1 沉默后細胞遷移和侵襲能力顯著增強,相比 Control 組和 siRNA-NC 組差異有統計學意義(P<0.05)。siRNA-CDH1組 中 vimentin、MMP-9、MMP-2 以及 N-cadherin 的表達顯著上調,vimentin、MMP-9、MMP-2 以及 Slug、Snail 的 mRNA 表達水平也上調,相比 Control 組和 siRNA-NC 組差異有統計學意義(P<0.05)。結論CDH1 缺失可以增加 A549 細胞的增殖能力以及侵襲能力。

      發表時間:2019-09-25 09:48 導出 下載 收藏 掃碼
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